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鉴定知识
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DNA鉴定-PCR抑制物和DNA降解

        为法医DNA分型提取生物检材时,防止DNA模板的降解和去除PCR反应的抑制物都很重要。抑制物或降解DNA的存在会导致PCR反应的彻底失败或对大片段PCR产物检测的灵敏度降低。

        在法医检案中通常有两种PCR抑制物:血色素和棉布的靛青染料。在进行线粒体DNA扩增时毛发中的黑色素也是一种PCR抑制物。这些抑制物在PCR扩增时可结合于Taq DNA聚合酶的活性位点上,抑制酶的扩增功能。

        DNA可通过很多机制降解,包括酶解和化学作用( Lindahl,1993)。在细胞(或器官)死亡后,其中的DNA分子将面临细胞核酸酶,以及周围环境中的细菌、真菌和昆虫的猛攻( Poinar,2003)。另外,水解作用和氧自由基的破坏作用可限制DNA的成功修复和扩增。水解作用的主要目标是糖骨架的寡糖基。这里的裂解会导致核碱基丢失,然后单链终止。 如果一条足够长的DNA链在引物退火部位或者在正反引物之间断裂,PCR扩增的效率就会下降或者导致目标片段扩增失败。所以,高温和潮湿这些能加速水解的因素,是保存DNA分子完整的最大敌人。另外,紫外线照射(如阳光直射)会导致DNA分子中临近的胸腺嘧啶交联,这样会抑制PCR反应中DNA聚合酶的活性。

    更多详情:湖北亲子鉴定

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